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4種核酸染料的比較
點(diǎn)擊次數(shù):7999 更新時(shí)間:2017-08-23
   4種核酸染料的比較
  1、EB(溴化乙錠)
  溴化乙錠是一種高度靈敏的嵌入性熒光染色劑,為強(qiáng)致癌誘變劑,但價(jià)格便宜。它與DNA的結(jié)合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強(qiáng)度的飽和溶液中,大約每2.5個(gè)堿基插入一個(gè)溴化乙錠分子。EB的這種特性使其成為一種核酸染料,常用于瓊脂糖凝膠電泳中的核酸染色。溴化乙錠在紫外區(qū)302nm和366nm處有吸收峰,在紫外光的照射下,溴化乙錠可被激發(fā)出橙紅色的熒光(590nm)。結(jié)合有DNA的溴化乙錠復(fù)合物的熒光強(qiáng)度要比沒有合DNA的染料高出20-30倍,因此溴化乙錠可檢測到少至10ng的DNA條帶,非常靈敏。
  2、Gel Green和Gel Red
  由Biotium公司研發(fā)推出的EB替代染料,染色效果和EB差不多,在紫外下不容易淬滅,可以用于膠回收。但價(jià)格較貴。
  GelRed和GelGreen是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定性于一身的的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過美國環(huán)保局安全認(rèn)定,廢棄物可直接倒入下水道,而不會造成任何環(huán)境污染。其特點(diǎn)有:
  1)高靈敏度:GelRed和GelGreen是目前市場中zui靈敏的凝膠核酸染料之一;
  2)穩(wěn)定性*:可以使用微波爐加熱,可以在室溫下保存;
  3)更安全:艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明,該染料的誘變性遠(yuǎn)小于溴化乙錠(EB);
  4)廣泛的適應(yīng)性:適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色;
  5)染色過程簡單:與EB一樣,在預(yù)制膠和電泳過程中不必?fù)?dān)心染料降解;而電泳后染色過程也只需30分鐘且無需脫色或沖洗;
  6)對DNA和RNA的遷移影響小:對核酸遷移的影響小于SYBR Green I?;
  7)與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容:使用312nm激發(fā)的UV凝膠成像系統(tǒng)時(shí),GelRed可以的替代EB;使用254nm激發(fā)的UV凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí),GelGreen足以替代任意一種SYB染料。但該染料會使小片段DNA遷移慢一些(與EB相比).
  3、Gold View I型/II型
  Goldview對于大片段DNA的染色效果良好,但是在對于500bp以下的片段效果不是很好,還有一個(gè)很致命的弱點(diǎn)是它的熒光基團(tuán)在紫外燈下非常容易淬滅,一般5-10min條帶就會消失。另外Goldview不適用于膠回收。Goldview其實(shí)就是AO(丫啶橙,一種劇毒產(chǎn)品)且熒光效果遠(yuǎn)不如EB,靈敏度差,本底色嚴(yán)重,不利用于回收,不穩(wěn)定,在紫外燈下其誘導(dǎo)突變能力*
  4、SYBR Green和SYBR Gold
  穩(wěn)定性差,也有毒性。它屬于花箐素類核酸染料,花箐類染料不是無毒的,而只是低毒的,電泳級別的是經(jīng)過修飾的,修飾有三種:1.加入鹵素或*基。2.插入環(huán)羥基。3.加入穩(wěn)定劑。SYBR Green I是高靈敏的DNA熒光染料,適用于各種電泳分析,操作簡單:無須脫色或沖洗。至少可檢出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I與dsDNA結(jié)合熒光信號會增強(qiáng)800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝膠樣品熒光信號強(qiáng),背景信號低。SYBR Green和SYBR Gold相對于EB的穩(wěn)定性要差很多。SYBR系列的染料也能進(jìn)入細(xì)胞染色線粒體以及核內(nèi)的DNA,從而產(chǎn)生危害。SYBR Green I已被證實(shí)在紫外光下將會產(chǎn)生強(qiáng)誘變能力,使DNA或其他物質(zhì)發(fā)生突變。
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